前言

抗体-小分子药物偶联物（ADCs）作为一种新兴的生物治疗产品，通过抗体精准识别靶向细胞，并在细胞内释放偶联的小分子药物，以实现对病变细胞的精准杀灭，同时减少对正常细胞的伤害。自2000年FDA批准首个ADC药物Mylotarg®（gemtuzumab ozogamicin）以来，到2025年6月，全球已有19个ADC获批上市。2023年，全球ADC销售首次突破百亿美元，2024年销售额依旧保持强劲增长势头。

在2024年全球ADC销量前十中，罗氏生产的KADCYLA（恩美曲妥珠，赫赛莱）排名第二。该药物自2013年获FDA批准以来，主要用于HER2阳性乳腺癌的治疗，预计2024年全球销售额约为23亿美元。KADCYLA是一种靶向HER2的ADC，其结构复杂，包含人源化抗-HER2 IgG1曲妥珠单抗，这种抗体与微管抑制药物DM1通过稳定的硫醚连接体共价结合。在分子量分布范围147~158kDa的基础上，其药物/单抗偶联比（DAR）平均值约为35，这使得对其表征成为一项挑战。

在本研究中，我们应用了新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro Biopharma对KADCYLA进行全面表征。这一平台在生物医药领域展现了卓越的分析能力，尤其是在电子转移解离辅助的高能碰撞碎裂（EThcD）功能方面，为药物偶联位点的精准鉴定及翻译后修饰（PTM）的识别提供了有力支持。

应用亮点

本研究中，我们采用Excedion Pro Biopharma质谱仪对KADCYLA进行了深入表征。该仪器具有拓展至m/z=12,000 Da的质量检测范围，能够在非变性条件下测定单克隆抗体及其他大分子量蛋白复合物的分子量。此外，选配的ETD功能使得我们能实现快速灵敏的ETD/EThcD碎裂，与高能碰撞碎裂（HCD）结合使用，提供了全面的蛋白序列覆盖及PTM鉴定信息。

非变性条件下对KADCYLA的完整分子量测定是生物医药产品表征中不可或缺的一部分。除了完整分子量外，平均DAR值和药物负载分布（DLD）是评估药物质量的关键属性。在本实验中，我们在非变性条件下对KADCYLA进行完整分子量测定，从而获得了0~8的药物偶联分布，并通过软件处理得到了平均DAR值347，这与文献报道的值一致。

基于液质联用的肽图分析是表征生物治疗型产品的常用方法。青睐HCD碎裂的同时，我们还利用EThcD，以准确定位修饰位点并实现常见翻译后修饰的鉴定。在本研究中，尝试使用Trypsin和AspN两种蛋白酶对KADCYLA进行变性酶解，并通过ddHCDMS2和ddEThcDMS2数据采集获得了100%序列覆盖度，证明了Excedion Pro Biopharma在肽图分析中的兼容性和高质量谱图的获得能力。

除药物偶联位点外，与药品质量相关的各种翻译后修饰也需进行表征与监控。此研究显示，即使对相对含量较低的修饰肽段也能进行有效鉴定，进一步证明了Excedion Pro Biopharma在这些方面的优秀表现。

总结

本文展示了利用918博天娱乐官网的新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro Biopharma 对KADCYLA进行表征的实验结果。在非变性条件下的完整分子量测定以及高灵敏度的EThcD碎裂技术的应用，使得我们能够精准识别肽段、偶联位点及翻译后修饰。这一创新技术的引入，使ADC等复杂生物分子的表征得以全面深化，有助于推动生物医药领域的发展。