918博天娱乐官网的抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）如下：

1. 包被步骤

1) 使用包被缓冲液配置1-10μg/ml抗原溶液（现配现用）。

2) 向高结合力ELISA板（货号80112）每孔加入100μl抗原溶液，随后覆以封板膜，在室温下轻摇孵育2-6小时，或将其放置于4℃过夜。

3) 吸弃溶液并用洗涤缓冲液对板进行2次清洗。

2. 封闭步骤

1) 将封闭缓冲液母液稀释成工作液，每孔加入300μl，室温下轻摇孵育2-6小时，或在4℃下过夜。

2) 吸弃封闭液并在吸水纸上轻拍干，板子可立即使用或密封保存于4℃备用。

3. 抗体效价检测

1) 使用抗体稀释液对免疫前/免疫后血清进行从1:100到1:100,000的梯度稀释，每孔添加100μl，随后覆以封板膜，在室温下轻摇孵育30分钟。

2) 吸弃液体，用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300μl，确保洗涤充分以避免高背景）。

3) 使用抗体稀释液配制HRP标记抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔添加100μl（稀释不当会导致显色偏弱或背景过高）。

4) 覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。

5) 吸弃液体，洗板5次后轻拍干。

6) 每孔加入100μl现成的TMB底物溶液。

7) 覆以封板膜，室温轻摇孵育，直至阳性孔呈现蓝色（最长15分钟）。

8) 每孔添加100μl终止液，使蓝色转为黄色。

9) 在450nm波长下读取吸光度。

注意事项

1) 本ELISA流程适用于针对纯化抗原（蛋白质或多肽）产生的抗体的定性检测，不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2) 本流程默认一抗来自兔源，若使用其他宿主动物需选择相应的二抗。

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