猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品信息

产品名称：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的一种高度接触性、出血性和致死性的猪传染病。该病以高热、微血管壁变性引起广泛出血、坏死和梗塞为特征。此试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，适用于猪瘟病毒疫苗免疫效果的评估。

原理

本试剂盒含有预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，基于酶联免疫法（ELISA）原理，检测猪血清和血浆样本中的猪瘟病毒抗体。在实验中，添加对照血清和待测样本，若样本中含有猪瘟病毒抗体，则与酶标板上的抗原结合。经过清洗后，加入酶标记物，与抗原-抗体复合物特异性结合。随后添加TMB底物液，在反应中生成蓝色产物，显色深浅与样本中的特异性抗体含量成正相关，终止反应后产物变为黄色。最终，通过在450nm波长下测定吸光值即可判断样品中是否含有猪瘟病毒抗体。

储存及有效期

本试剂盒应储存在2～8℃环境下，有效期为12个月。开封后的包被板需在避光条件下于2～8℃保存，避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器

本试剂盒适用于包含450nm及630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备以及可调微量移液器。

样品准备

1. 动物全血需按常规方法制备血清，要求血清清亮、无溶血、无污染。可在2～8℃条件下保存1周，长期保存需置于-20℃。
2. 使用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（例如：5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀），阴阳性对照则无需稀释。
3. 使用前，将浓缩洗涤液恢复至室温，使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水稀释至20倍制成工作洗涤液（例如：19份水+1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 测试前，将试剂盒置于室温下恢复30分钟。
2. 取所需酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未使用的板条需及时密封，保存于2～8℃。
3. 分别在对照孔中加入各100μl阴阳性对照，样品孔加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀后，盖好盖板膜，在37℃（可用水浴）避光反应30分钟。
5. 将孔内液体弃去，每孔加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次吸干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 重复洗涤步骤。
8. 依次在每孔加入50μl底物液A和50μl底物液B，混匀，盖好盖板膜，并避光在37℃反应10分钟。
9. 加入50μl终止液，混匀，并在450nm（630nm可作参比波长）测定各孔的吸光值。

参考值

在正常实验情况下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≤0.3，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≥0.6。

检验结果的判定

1. 测得样品的OD值（ODS）。
2. 阈值计算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；若SP值≥0.2，结果判定为阳性；若SP值＜0.2，结果判定为阴性。
3. 如检测结果为阴性，表示猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

试验方法的局限性

本实验仅适用于定性检测猪血清、血浆中猪瘟病毒抗体，依据SP值可粗略评估抗体水平强、中、弱。

注意事项

1. 实验操作需佩戴手套、穿工作衣，严格遵守消毒隔离制度，实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免皮肤和衣物接触，如不慎接触应立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板从冷藏环境取出后应恢复至室温后再开袋，未使用的板需放入干燥剂的密封袋中保存。
4. 浓缩洗涤液低温下容易结晶，使用时应恢复至室温完全溶解。
5. 洗涤时需确保每孔都加满液体，以防孔口留有游离酶未清洗干净。
6. 待检样品应保持新鲜，试验结果判定以酶标仪读数为准。
7. 不同批号的试剂组分不得混合使用。

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